Субпопуляции лимфоцитов костного мозга

Исследование включает в себя определение абсолютного и относительного количества CD19+ B-лимфоцитов (B-клетки) и углубленный анализ малых популяций В-лимфоцитов. Это В1-клетки (популяция, связанная с продукцией аутоантител), В-клетки памяти. Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.

Синонимы русские

Иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии, В-клетки, В-лимфоциты, В1-клетки.

Синонимы английские

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens, Human B cells, B lymphocytes.

Метод исследования

Проточная цитометрия.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
• Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование – характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

CD19

СD19 является ключевой молекулой трансдукции сигналов, регулирующих развитие, активацию и дифференцировку В-лимфоцитов. Этот антиген экспрессируется практически на всех клетках В-ряда и не обнаруживается на лимфоидных клетках других типов, данный маркер рекомендуется для количественной характеристики общей популяции В-лимфоцитов.

Клиническая значимость характеристики определения количества СD19+ лимфоцитов:

– бактериальные и паразитарные инфекционные заболевания;

– агаммаглобулинемия и дисгаммаглобулинемия;

– злокачественные опухоли;

– злокачественные новообразования В-лимфоцитов (лимфолейкозы, лимфомы, миеломная болезнь и т.д.);

– аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит и др.; ценность особенно возрастает при дополнительном включении анализа на CD5-фенотип);

– контроль эффективности проведенной вакцинации (в особенности противобактериальными вакцинами).

Функциональной пробой является постановка реакции бласттрансформации с использованием В-клеточных митогенов: липополисахарида (ЛПС) и митогена лаконоса.

Следует иметь в виду, что с превращением В-лимфоцитов в плазматические клетки на последних происходит утрата CD19-рецепторов. Важным является также то, что помимо В-клеток высокая экспрессия CD19 характерна и для фолликулярных дендритных клеток.

CD5

Молекулы CD5, экспрессированные на Т- или В-лимфоцитах, принимают непосредственное участие в модулировании сигнала, проводимого через антигенспецифический рецепторный комплекс (TCR и BCR). Помимо своей двойной экспрессии, CD5 может быть двойным рецептором, обеспечивающим стимулирующие или ингибирующие сигналы, в зависимости как от типа несущих его клеток, так и от стадии клеточного развития.

Клиническая значимость включения дополнительного анализа CD5-маркера состоит в следующем: после трансплантации костного мозга существенным образом уменьшается количество CD3+ Т-клеток, на которых не экспрессированы молекулы CD5. Чем выраженнее это уменьшение, тем тяжелее течение развивающейся болезни “3трансплантат против хозяина”. У человека герпес-вирусные инфекции индуцируют утрату экспрессии CD5 (а также и других костимуляторных молекул, например CD28 и CD6) в популяции CD8+ Т-клеток, которая после инфицирования значительно возрастает. Поскольку, как уже указывалось выше, CD5-маркер может быть экспрессирован на клетках В-клеточного ряда, то определенная клиническая значимость тестирования этого маркера характерна и при фенотипическом анализе В-лимфоцитов. СD5 представляет собой фенотипический маркер, обнаруживаемый при некоторых В-клеточных лимфопролиферативных расстройствах (В-ХЛЛ, лимфома маргинальной зоны селезенки, волосатоклеточный лейкоз и т.д.). Для ряда других аутоиммунных расстройств (ревматоидный артрит, синдром Шегрена, инсулинозависимый сахарный диабет, болезнь Грейвса и т.д.) характерна экспансия субпопуляции В1а-клеток (СD5+).

Метод позволяет определить количество популяции В-лимфоцитов:

• В-лимфоциты (CD19+CD3-);

и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

• В-1-клетки (CD19+CD5+CD27-CD45+), связанные продукцией аутоантител;
• В-2-клетки (CD19+CD5-CD27-CD45+);
• В-клетки памяти (CD19+CD5-CD27+CD45+).

Когда назначается исследование?

Относительное количество общих В-лимфоцитов – важный диагностический признак. При воспалительных заболеваниях наблюдается значительное снижение процента В-лимфоцитов. Особенно ярко это выражено при остром панкреатите, хроническом пародонтите и тонзиллите, гнойном осложнении травм. Противоположный эффект наблюдается при острых и хронических гепатитах, у больных с тяжелым сепсисом с сочетанной патологией внутренних органов.

В настоящее время среди В-клеток выделяют три основные субпопуляции: В-1, В-2 и В-клетки памяти. Достаточно важная роль при данном делении отводится молекуле CD5. Молекула CD5 была расценена как возможный маркер B-клеток, позволяющий различать их субпопуляции: CD19+CD5+ B-клетки (также называемые B-1 клетки) и CD19+ CD5- B-клетки (или B-2 клетки).

B-1 клетки вызывают значительный интерес за счет того, что их ассоциируют с продукцией аутоантител и, как следствие, с аутоиммунными заболеваниями. Значительная роль B-1 клеток отмечена при ревматоидном артрите, системной красной волчанке и синдроме Шегрена. Увеличение количества CD5+ B-клеток наблюдали у пациентов, страдающих миастенией, инсулин-зависимым диабетом и тиреоидитом Хашимото. Значимость определения уровня циркулирующих В1-клеток показана также при первичных иммунодефицитах, например у пациентов с CVID (common variable immnodeficiency – общая вариабельная иммунная недостаточность). Доля CD5+ В-клеток может составлять треть и более от всех В-клеток при аутоиммунных заболеваниях.

Заболевания, при которых определение относительного количества В1-является диагностически значимым признаком (Зурочка А.В. и Хайдуков С.В., 2013).

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдромам.

С аллергическим (атопическим) синдромом:

• атопический дерматит;
• нейродермит;
• экзема с инфекционным компонентом;
• тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.

С аутоиммунным синдромом:

• ревматоидный артрит;
• рассеянный склероз;
• диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
• аутоиммунный тиреоидит;
• неспецифический язвенный колит.

Что означают результаты?

Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.



Важные замечания

• Результаты данного исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов.
• Оценка показателей в динамике существенно повышает клиническую значимость исследования.

Литература

1. Хаитов, Р.М. Аллергология и иммунология : национальное руководство / под ред. Р.М. Хаитова, Н.И. Ильиной. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 656 с.
2. Хаитов, Р.М. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы : руководство для врачей / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин, А.А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 352 с.
3. Зуева Е.Е. Иммунная система, иммунограмма : рекомендации по назначению и применению в лечебно диагностическом процессе /Е.Е Зуева, Е.Б. Русанова, А.В. Куртова, А.П. Рыжак, М.В. горчакова, О.В. Галкина – СПб. – Тверь: ООО «издательство «Триада», 2008. – 60 с.
4. Кетлинский, С.А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина. СПб. : Гиппократ, 1998. – 156 с. Ярилин, А.А. Иммунология : учебник / А.А. Ярилин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с.
5. Хаитов, Р.М. Иммунология : атлас / Р.М. Хаитов, А.А. Ярилин, Б.В. Пинегин.М. : ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 624 с.
6. Хаитов, Р.М. Иммунология : учебник / Р.М. Хаитов. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 320 с.
7. Хаитов, Р.М. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. – 2001. – N4. – С. 4–6.
8. Whiteside, T.L. Role of Human Natural Killer Cells in Health and disease / T.L. Whiteside, R.B. Herberman // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. – 1994. – Vol. 1, №2. – P. 125–133.
9. Ginadi, L. Differential expression of T-cell antigens in normal peripheral blood lymphocytes : a quantitative analysis by flow cytometry / L. Ginadi, N. Farahat, E. Matutes [et al.] // J. Clin. Pathol. – 1996. – Vol. 49, № 1. – P. 539–544.
10. Merser, J.C. Natural killer T-cells : rapid responders controlling immunity and disease / J.C. Merser, M.J. Ragin, A. August // International J. Biochemistry & Cell Biology. – 2005. – № 37. – P. 1337–1343.
11. Никитин, В.Ю. Маркеры активации на Т-хелперах и цитотокси ческих лимфоцитахна различных стадиях хронического вирусного гепатита С / В.Ю. Никитин, И.А. Сухина, В.Н. Цыган [и др.] // Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. – 2007. – Т. 17, № 1. – С. 65–71.
12. Boettler, T. T cells with CD4+CD25+ regulatory phenotype suppress in vitro proliferation of virus-specific CD8+ T cells during chronic hepatitis C virus infection / T. Boettler, H.C. Spangenberg, C. Neumann-Haefelin [et al.] // J. Virology. − 2005. − Vol. 79, N 12. −P. 7860–7867.
13. Ormandy, L.A. Increased Populations of Regulatory T Cells in Peripheral Blood of Patients with Hepatocellular Carcinoma / L.A. Ormandy, T. Hillemann, H. Wedemeyer [et al.] // J. Cancer Res. − 2005. − Vol. 65, N 6. − P. 2457–2464.
14. Sakaguchi, S. Naturally arising FoxP3-expressing CD4+CD25+ regulatory T cells in immunological tolerance to self- and non-self / S. Sakaguchi // Nature Immunol. − 2005. −Vol. 6, N 4. − P. 345–352.
15. Romagnani, S. Regulation of the T cell response / S. Romagnani // Clin. Exp. Allergy. –2006. − Vol. 36. − P. 1357–1366.
16. Хайдуков С.В., Основные и малые популяции лимфоцитов периферической крови человека  и их нормативные значения  (метод многоцветного цитометрического анализа) /Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Тотолян А.А., Черешнев В.А.  // Мед. иммунология. – 2009. -Т. 11 (2-3). – С. 227-238.