Смешанная культура лимфоцитов екатеринбург

Отражает состояние всех обменных процессов в организме человека (белковый обмен, углеводный, жировой обмен, электролитный обмен). Каждый вид обмена веществ зависит от работы определенных органов или даже систем органов. Другими словами, биохимический состав крови отражает работу конкретных органов и систем органов. 

Например, уровень глюкозы может указать на функциональное состояние поджелудочной железы, печени, гипофиза, надпочечников, жировой ткани и др. Уровень белка крови на состояние печени, почек, желудочно-кишечного тракта и др. Уровень билирубина, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатаз указывает на функциональные возможности печени и желчного пузыря. 

2. ГОРМОНАЛЬНОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ

Гормоны репродуктивной системы: 
1) ЛГ (лютеинизирующий гормон, лютропин) (LH) – 3-5 день цикла
2) ФСГ (фолликул-стимулирующий гормон, фоллитропин) (FSH) – 3-5 день цикла
3) Пролактин (prolactin) – 3-5 день цикла
4) Эстрадиол (E2) (estradiol) – 22-24 день цикла
5) Прогестерон (progesterone) – 22-24 день цикла
6) Тестостерон (testosterone) – 10 день цикла
7) 17-гидроксипрогестерон (17-ОН прогестерон) (17-OH-progesterone) – 10 день цикла
8) Дегидроэпиандростерон-сульфат (ДЭА-С) (dehydroepiandrosterone-sulfate) – 10 день цикла
9)Андростендион – 10 день цикла

Определение функции щитовидной железы (обязательно провериться тем, у кого с ней проблемы)

1) ТТГ (тиреотропный гормон, TSH) 3-5 день цикла
2) Трийодтиронин (Т3) общий
3) Трийодтиронин (Т3) свободный – 3-5 день цикла
4) Тироксин (Т4) общий
5) Титроксин (Т4) свободный – 3-5 день цикла
6) Яночкина (тиреоглобулин)
7) ТСГ (тироксин-связывающий белок)
8) Антитела к рецепторам ТТГ

Прочие гормоны

1) Инсулин
2) Проинсулин
3) АТ к инсулину
4) С-пептид
5) Кальцитонин
6) Остеокальцин
7) Паратгормон
8) 17-кетостероиды (моча) (17-КС)
9) 17-оксикетостероиды (моча) (17-ОКС)
10) Кортизол – 10 день цикла

Гормоны стресса: пролактин, кортизол, ЛГ – могут быть повышены не из-за гормональных заболеваний, а из-за хронического или острого (поход в больницу и сдача крови из вены) стресса. Их нужно пересдать. 
Для диагноза «гиперпролактинемия», например, необходимо трехкратное измерение повышенного уровня пролактина. 
Все гормоны сдают строго натощак, как и любые анализы крови!!!! 
Если нет возможности сдать нужные гормоны в нужные дни цикла, лучше не сдавать вообще, чем сдавать в другие дни цикла. Анализ будет абсолютно неинформативным!!!!!

3. ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ

Полная иммунограмма: субпопуляции лимфоцитов + показатели гуморального иммунитета (уровни антител в крови) + показатели антимикробного иммунитета.

Аутоимунные антитела: образуются при развитии в организме аутоиммунных нарушений. Аутоиммунные реакции – это патологический ответ иммунной системы человека на компоненты собственных тканей организма – могут проявляться в выработке антител к фосфолипидам, фрагментам ДНК, факторам щитовидной железы и др. В акушерско-гинекологической практике подобные нарушения рассматриваются в рамках антифосфолипидного синдрома. Аутоантитела вызывают повышение свертывающей способности крови, развитие микротромбозов в сосудах плаценты, нарушение имплантации, маточно-плацентарную недостаточность, синдром внутриутробной задержки развития плода, гибель зародыша.

1) Антикардиолипин IgG, IgM. Антикардиолипиновые антитела (Anti-Cardiolipin Ab) обнаруживают в сыворотке больных с сердечно-сосудистой недостаточностью, при тромбоцитопениях, тромбозах, самопроизвольных выкидышах. Антикардиолипиновые антитела связываются с фосфолипидами эндотелиальных клеток кровеносных сосудов и миокарда. Образовавшийся комплекс аутоантител и кардиолипина приводит к распаду эндотелиальных клеток и, как следствие, к воспалительным реакциям. Это, в свою очередь, приводит к образованию тромбов. Присутствие β2-гликопротеина необходимо для связывания антикардиолипиновых антител с кардиолипином. 

2) Антитела к денатурированной ДНК – отражают активность ревматоидного артрита, склеродермии, болезни Рейно, СКВ и др.

3) Антитела к двухспиральной, нативной ДНК (anti-dsDNA). Высокоспецифичный маркер системной красной волчанки.

4) Антитела к фосфолипидам (IgM, IgG). Важный диагностический критерий антифосфолипидного синдром (АФС).

5) Антиядерные антитела (АЯА, НЕр2 ANA), антинуклеарный фактор (АНФ). Один из распространенных скрининговых тестов, использующихся в диагностике аутоиммунных заболеваний.

6) Антитела к тиреоглобулину (АТ-Яночкина). Антитела к белку-предшественнику тиреоидных гормонов. 

7) Антитела к тиреоидной пероксидазе (АТ-ТПО, микросомальные антитела). 

8) Антиспермальные антитела.

9) Антитела к фактору роста нервов (АТ к ФРН) (Нейротест).

10) Антитела к хорионическому гонадотропину (факторы раннего невынашивания). 

11) Антитела к 2-гликопртеину –I, IgG, IgM. (!!!) Обнаружение данных антител может быть сопряжено с высоким риском акушерской патологии (невынашивание беременности, внутриутробная гибель плода, бесплодие неясного генеза).

4. ГЕМОСТАЗИОГРАММА И КАУЛОГРАММА, ВКЛЮЧАЯ ВОЛЧАНОЧНЫЙ АНТИКОАГУЛЯНТ (ВА)

Гемостазиограмма – это оценка функционального состояния свертывающей системы крови (тромбоцитарное звено, плазменное звено). По этому исследованию можно судить о взаимоотношениях свертывающей и противосвертывающей системы крови, что очень важно в акушерско-гинекологической практике. Патология может проявляться как при активации свертывающей системы крови (тромбозы в сосудах всего организма матери, в сосудах плаценты), так и при активации противосвертывающей системы крови (кровотечения, преждевременная отслойка плаценты и т.д.).
Полная коагулограмма содержит очень большое число разных тестов, что не всегда реализуется , в том числе и по экономическим причинам. Выход из этой ситуации в использовании двухэтапного гемостазиологического обследования. Тесты первого этапа предназначены для выявления изменений в том или ином звене гемостаза. 

Коагулограмма 1-го этапа включает:

1) протромбиновый тест – используется для общей характеристики внешнего пути свертывания крови; 

2) определение АЧТВ – применяется для выявления суммарной активности факторов внутреннего пути образования фибрина; 

3) определение количества тромбоцитов. Важно, чтобы этот тест выполнялся не только и не столько в общеклиническом анализе крови, а именно в составе коагулограммы 1-го этапа, поскольку это позволяет получить более цельную – диагностически и прогностически – картину состояния системы гемостаза; 

4) определение концентрации фибриногена – дает информацию об основном коагуляционном субстрате; 

5) определение тромбинового времени – характеризует конечный этап процесса свертывания крови, зависящий от содержания фибриногена и ингибиторов, блокирующих действие тромбина и превращение фибриногена в фибрин; 

6) определение времени свертывания цельной крови – оценивает общий результат взаимодействия про- и антикоагулянтных систем и фибринолиза в данный конкретный момент времени; 

7) определение величины гематокрита. 

Перечисленные тесты позволяют получить достаточно общее представление о свертывающем и противосвертывающем потенциале крови пациента. Набор из этих семи тестов, являясь минимально необходимым для первичной диагностики, направлен на то, чтобы привлечь внимание специалиста к состоянию того или иного звена гемостаза. Вышеназванные тесты демонстрируют только следствия тех или иных нарушений свертывания крови. Поэтому именно коагулограмма 1-го этапа определяет набор тех методов, которые в дальнейшем предоставят всю необходимую информацию непосредственно о причинах гемостазиологических нарушений. Однако коагулограмму 1-го этапа возможно дополнить поиском гемокоагуляционных маркеров (1-2 метода), специфичных для определенной категории пациентов. В этом случае полученная информация (особенно в амбулаторных условиях) может оказаться достаточной для назначения терапии. 
Коагулограмма второго этапа обследования предполагает более точную оценку про- и антикоагулянтных механизмов, а также характеристику фибринолитической активности. Более того, на этом этапе осуществляется поиск маркеров, свидетельствующих о наличии уже сформировавшихся тромбов и/или характеризующих активность ДВС крови. 

Коагулограмма 2-го этапа должна содержать: 

1) оценку агрегационной активности тромбоцитов – поскольку нарушение физической целостности или биохимического состояния участка эндотелия приводит к превращению атромбогенного сосуда в очаг тромбообразования через адгезию и агрегацию тромбоцитов и образование дополнительных порций тромбина;

2) исследование антикоагулянтной системы, прежде всего, по ее главным компонентам: антитромбину III, эндогенному гепарину. В тех случаях, когда необходимо расширить информацию о состоянии системы естественных антикоагулянтов могут быть выполнены исследования активности протеина С, протеина S и простагландина I2, что позволяет оценить активность реакций, естественно ингибирующих факторы VIIIа, Vа и агрегацию тромбоцитов; 

3) определение общей фибринолитической активности крови – позволяет выявить суммарную напряженность реакций, борющихся с тромботическими осложнениями, определение Хаггеман-зависимого фибринолиза – характеризует уровень активации основных плазменных протеолитических систем и определение плазминогена –оценивает возможности фибринолитической системы; 

4) определение маркеров внутрисосудистого свертывания крови: растворимых комплексов фибрин-мономера, продуктов деградации фибриногена (ПДФ), Д-димера; 

5) определение специфических гемокоагуляционных маркеров, присущих данной категории пациентов: фактора Виллебранда, факторов VIII, IX и др.

5. СКЛ

СКЛ = смешанная культура лимфоцитов = MLC = mixed lymphocyte culture.
Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.
Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.
Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).
Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина — “кирпичика” ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.
Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что в бой вступают клетки всех участников смешанной культуры. 
Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.
Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.
Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.
Дело в том, что сохранение беременности — активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.
СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции.
Поэтому при обнаружении “плохой” конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.

6. ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ

Анализ позволяет определить наличие или отсутствие патогенных микроорганизмов, вирусов, в некоторых случаях произвести типирование на патогенные и непатогенные биоварианты. 
Урогенитальная инфекция может стать причиной развития острых и хронических воспалительных заболеваний органов малого таза, бесплодия и невынашивания беременности, патологических изменений эпителия шейки матки (эрозия, дисплазия). 

7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИТЕЛ К ВИРУСАМ, БАКТЕРИЯМ, ПРОСТЕЙШИМ В КРОВИ

-IgG, IgM к герпесу
-IgG, IgM к цитомегаловирусу (ЦМВ)
-IgG, IgM к токсоплазмам
-IgG, IgM к краснухе
-IgG, IgM к хламидиям

Наличие антител IgG означает иммунитет к этим инфекциям, и не является препятствием к беременности.

Наличие IgM означает острую стадию, планирование в этом случае необходимо отложить до выздоровления.

Если к краснухе нет антител IgG, необходимо сделать прививку и после нее предохраняться еще 3 месяца. Не спрашивайте своих родителей, болели ли Вы краснухой, точно знать это невозможно – она может протекать под маской ОРЗ и наоборот. Точную информацию может дать только анализ крови на антитела.

8. РАННЯЯ ДИАГНОСТИКА ПРЕДРАКОВЫХ ПРОЦЕССОВ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

1) Мазок по Папаниколау
2) Мазок из полости матки для цитологического обследования (Утеробраш)
3) Биопсия эндометрия (Пайпель)
4) Расширенная кольпоскопия 

9. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2) HLA- типирование.
Это исследование крови, определяющее, насколько супруги сходны или различимы по антигенам (белкам) тканевой совместимости. При нормальной беременности белки клеток трофобласта, унаследованные от отца, посылают сигнал в организм матери, запускающий защитную реакцию вокруг зародыша. Если зародыш иммунологически похож на организм матери, своевременое распознавание беременности нарушается. В таком случае организм матери может отторгнуть зародыш.
Проводится типирование по нескольким показателям тканевой совместимости.

3) Диагностика наследственного полиморфизма системы гемостаза и гипергмоцистеинемии. 

1. Мутации системы гемостаза – 3 фактора: 
– лейденская мутация (мутация фактора V); 
– мутация гена протромбина; 
– мутация MTHFR. 
Исследования последних лет показали, что у пациенток с привычным невынашиванием беременности часто обнаруживают один или несколько ген?