Подсчет абсолютного количества лимфоцитов

Несколько лет назад я написал, чем отличаются вирусные и бактериальные инфекции по общему анализу крови, каких именно клеток становится больше и меньше при различных инфекциях. Статья получила определенную популярность, но нуждается в некотором уточнении.

Еще в школе учат, что количество лейкоцитов должно составлять от 4 до 9 миллиардов (× 109) на литр крови. В зависимости от своих функций лейкоциты делятся на несколько разновидностей, поэтому лейкоцитарная формула (соотношение разных видов лейкоцитов) в норме у взрослого человека выглядит так:

нейтрофилы (суммарно 48-78%):
- юные (метамиелоциты) — 0%,
- палочкоядерные — 1-6%,
- сегментоядерные — 47-72%,
эозинофилы — 1-5%,
базофилы — 0-1%,
лимфоциты — 18-40% (по другим нормам 19-37%),
моноциты — 3-11%.

Например, в общем анализе крови выявлено 45% лимфоцитов. Это опасно или нет? Нужно ли бить тревогу и искать перечень болезней, при которых в крови увеличивается количество лимфоцитов? Об этом и поговорим сегодня, потому что в одних случаях такие отклонения в анализе крови являются патологическими, а в других — не представляют опасности.

Этапы нормального кроветворения

Посмотрим результаты общего (клинического) анализа крови парня 19 лет, больного сахарным диабетом 1 типа. Анализ сделан в начале февраля 2015 года в лаборатории «Инвитро»:

Анализ, показатели которого рассматриваются в этой статье

Красным фоном в анализе выделены показатели, отличающиеся от нормальных. Сейчас в лабораторных исследованиях слово «норма» используется реже, оно заменено на «референсные значения» или «референтный интервал». Так делается, чтобы не запутать людей, потому что в зависимости от используемого метода диагностики одно и то же значение может быть как нормальным, так и отклонением от нормы. Референсные значения подбираются таким образом, чтобы им соответствовали результаты анализов 97-99% здоровых людей.

Рассмотрим результаты анализа, выделенные красным.

Гематокрит

Гематокрит — доля объёма крови, приходящаяся на форменные элементы крови (эритроциты, тромбоциты и тромбоциты). Поскольку эритроцитов численно намного больше (например, число эритроцитов в единице крови превышает число лейкоцитов в тысячу раз), то фактически гематокрит показывает, какую часть объема крови (в %) занимают эритроциты. В данном случае гематокрит на нижней границе нормы, а остальные показатели эритроцитов в норме, поэтому слегка сниженный гематокрит можно считать вариантом нормы.

Лимфоциты

В вышеупомянутом анализе крови 45,6% лимфоцитов. Это слегка выше нормальных значений (18-40% или 19-37%) и называется относительным лимфоцитозом. Казалось бы, это патология? Но давайте посчитаем, сколько лимфоцитов содержится в единице крови и сравним с нормальными абсолютными значениями их количества (клеток).

Число (абсолютное значение) лимфоцитов в крови равно: (4,69 × 109 × 45,6%) / 100 = 2,14 × 109/л. Эту цифру мы видим в нижней части анализа, рядом указаны референтные значения: 1,00-4,80. Наш результат 2,14 можно считать хорошим, потому что находится практически по середине между минимальным (1,00) и максимальным (4,80) уровнем.

Итак, у нас имеется относительный лимфоцитоз (45,6% больше 37% и 40%), но нет абсолютного лимфоцитоза (2,14 меньше 4,8). В данном случае относительный лимфоцитоз можно считать вариантом нормы.

Нейтрофилы

Общее количество нейтрофилов считается как сумма юных (в норме 0%), палочкоядерных (1-6%) и сегментоядерных нейтрофилов (47-72%), суммарно их 48-78%.

Этапы развития гранулоцитов

В рассматриваемом анализе крови общее количество нейтрофилов равно 42,5%. Мы видим, что относительное (в %) содержание нейтрофилов ниже нормы.

Посчитаем абсолютное количество нейтрофилов в единице крови:
4,69 × 109 × 42,5% / 100 = 1,99 × 109/л.

Относительно должного абсолютного количества клеток лимфоцитов имеется некоторая путаница.

1) Данные из литературы.

Содержание лейкоцитов у взрослых людей в норме:

	Относительное количество (в %)	Абсолютное количество (клеток × 109/л)
Нейтрофилы (суммарно):	48-78%	2.04-5.8
палочкоядерные нейтрофилы	1-6%	0.04-0.3
сегментоядерные нейтрофилы	47-72%	2.0-5.5
Эозинофилы	0.5-5.0%	0.02-0.3
Базофилы	0-1%	0-0.065
Лимфоциты	19-37%	1.2-3.0
Моноциты	3-11%	0.09-0.6

2) Референтные значения количества клеток из анализа лаборатории «Инвитро» (см. анализ крови):

нейтрофилы: 1.8-7.7 × 109/л.

3) Поскольку вышеуказанные цифры не совпадают (1.8 и 2.04), попробуем сами рассчитать пределы нормальных показателей числа клеток.

Минимально допустимое количества нейтрофилов — это минимум нейтрофилов (48%) от нормального минимума лейкоцитов (4 × 109/л), то есть 1.92 × 109/л.
Максимальное допустимое количество нейтрофилов — это 78% от нормального максимума лейкоцитов (9 × 109/л), то есть 7.02 × 109/л.

В анализе пациента 1.99 × 109 нейтрофилов, что в принципе соответствует нормальным показателям числа клеток. Однозначно патологическим считается уровень нейтрофилов ниже 1.5 × 109/л (называется нейтропения). Уровень между 1.5 × 109/л и 1.9 × 109/л считается промежуточным между нормой и патологией.

Нужно ли паниковать, что абсолютное число нейтрофилов находится около нижней границы абсолютной нормы? Нет. При сахарном диабете (и еще при алкоголизме) слегка сниженный уровень нейтрофилов вполне возможен. Чтобы убедиться, что опасения необоснованны, нужно проверить уровень молодых форм: в норме юных нейтрофилов (метамиелоцитов) — 0% и палочкоядерных нейтрофилов — от 1 до 6%. В комментарии к анализу (на рисунке не поместилось и обрезано справа) указано:

При исследовании крови на гематологическом анализаторе патологических клеток не обнаружено. Количество палочкоядерных нейтрофилов не превышает 6%.

У одного и того же человека показатели общего анализа крови довольно стабильны: если нет серьезных проблем со здоровьем, то результаты анализов, сделанные с интервалом в полгода-год, будут весьма похожи. Аналогичные результаты анализа крови у обследуемого были и несколько месяцев назад.

Таким образом, рассмотренный анализ крови с учетом сахарного диабета, стабильности результатов, отсутствия патологических форм клеток и отсутствия повышенного уровня молодых форм нейтрофилов можно считать практически нормальным. Но если возникают сомнения, нужно наблюдать пациента дальше и назначить повторный общий анализ крови (если автоматический гематологический анализатор не способен выявить все типы патологических клеток, то анализ должен быть на всякий случай дополнительно исследован под микроскопом вручную). В самых сложных случаях, когда ситуация ухудшается, для изучения кроветворения берут пункцию костного мозга (обычно из грудины).

Справочные данные при нейтрофилы и лимфоциты

Нейтрофилы

Главная функция нейтрофилов — борьба с бактериями путем фагоцитоза (поглощения) и последующего переваривания. Погибшие нейтрофилы составляют существенную часть гноя при воспалении. Нейтрофилы являются «простыми солдатами» в борьбе с инфекцией:

их много (ежедневно в организме образуется и поступает в кровоток около 100 г нейтрофилов, это количество увеличивается в несколько раз при гнойных инфекциях);
живут недолго — в крови циркулируют недолго (12-14 часов), после чего выходят в ткани и живут еще несколько дней (до 8 суток);
много нейтрофилов выделяется с биологическими секретами — мокротой, слизью;
полный цикл развития нейтрофила до зрелой клетки занимает 2 недели.

Нормальное содержание нейтрофилов в крови у взрослого человека:

юные (метамиелоциты) нейтрофилы — 0%,
палочкоядерные нейтрофилы — 1-6%,
сегментоядерные нейтрофилы — 47-72%,
всего нейтрофилов — 48-78%.

Лейкоциты, содержащие специфические гранулы в цитоплазме, относятся к гранулоцитам. Гранулоцитами являются нейтрофилы, эозинофилы, базофилы.

Агранулоцитоз — резкое уменьшение числа гранулоцитов в крови вплоть до их исчезновения (меньше 1 × 109/л лейкоцитов и меньше 0.75 × 109/л гранулоцитов).

К понятию агранулоцитоза близко понятие нейтропении (сниженное количество нейтрофилов — ниже 1.5 × 109/л). Сравнивая критерии агранулоцитоза и нейтропении, можно догадаться, что только выраженная нейтропения приведет к агранулоцитозу. Чтобы дать заключение «агранулоцитоз», недостаточно умеренно сниженного уровня нейтрофилов.

Причины сниженного количества нейтрофилов (нейтропении):

тяжелые бактериальные инфекции,
вирусные инфекции (нейтрофилы не борются с вирусами. Пораженные вирусом клетки уничтожаются некоторыми разновидностями лимфоцитов),
угнетение кроветворения в костном мозге (апластическая анемия — резкое угнетение или прекращение роста и созревания всех клеток крови в костном мозге),
аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит и др.),
перераспределение нейтрофилов в органах (спленомегалия — увеличение селезенки),
опухоли кроветворной системы:
- хронический лимфолейкоз (злокачественная опухоль, при которой происходит образование атипичных зрелых лимфоцитов и их накопление в крови, костном мозге, лимфоузлах, печени и селезёнке. Одновременно угнетается образование всех остальных клеток крови, особенно с коротким жизненным циклом — нейтрофилов);
- острый лейкоз (опухоль костного мозга, при которой происходит мутация стволовой кроветворной клетки и ее неконтролируемое размножение без дозревания в зрелые формы клеток. Может поражаться как общая стволовая клетка-предшественница всех клеток крови, так и более поздние разновидности клеток-предшественниц по отдельным кровеносным росткам. Костный мозг заполнен незрелыми бластными клетками, которые вытесняют и подавляют нормальное кроветворение);
недостатков железа и некоторых витаминов (цианокобаламин, фолиевая кислота),
действие лекарственных препаратов (цитостатики, иммунодепрессанты, сульфаниламиды и др.)
генетические факторы.

Увеличение числа нейтрофилов в крови (выше 78% или больше 5.8 × 109/л) называется нейтрофилией (нейтрофилезом, нейтрофильным лейкоцитозом).

4 механизма нейтрофилии (нейтрофилеза):

усиление образования нейтрофилов:

бактериальные инфекции,
воспаление и некроз тканей (ожоги, инфаркт миокарда),
хронический миелолейкоз (злокачественная опухоль костного мозга, при которой происходит неконтролируемое образование незрелых и зрелых гранулоцитов — нейтрофилов, эозинофилов и базофилов, вытесняющих здоровые клетки),
лечение злокачественных опухолей (например, при лучевой терапии),
отравления (экзогенного происхождения — свинец, змеиный яд, эндогенного происхождения — уремия, подагра, кетоацидоз),

активная миграция (досрочный выход) нейтрофилов из костного мозга в кровь,

перераспределение нейтрофилов из пристеночной популяции (возле кровеносных сосудов) в циркулирующую кровь: при стрессе, интенсивной мышечной работе.

замедление выхода нейтрофилов из крови в ткани (так действуют гормоны глюкокортикоиды, которые угнетают подвижность нейтрофилов и ограничивают их способность проникать из крови в очаг воспаления).

Для гнойных бактериальных инфекций характерно:

развитие лейкоцитоза — увеличения общего количества лейкоцитов (выше 9 × 109/л) преимущественно за счет нейтрофилии — роста числа нейтрофилов;
сдвиг лейкоцитарной формулы влево — увеличение количества молодых [юных + палочкоядерных] форм нейтрофилов. Появление юных нейтрофилов (метамиелоцитов) в крови является признаком тяжелой инфекции и доказательством, что костный мозг работает с большим напряжением. Чем больше молодых форм (особенно юных), тем сильнее напряжение иммунной системы;
появление токсической зернистости и других дегенеративных изменений нейтрофилов (тельца Деле, цитоплазматические вакуоли, патологические изменения ядра). Вопреки устоявшемуся названию, эти изменения вызваны не «токсическим эффектом» бактерий на нейтрофилы, а нарушением созревания клеток в костном мозге. Созревание нейтрофилов нарушается из-за резкого ускорения по причине чрезмерной стимуляции иммунной системы цитокинами, поэтому, например, в большом количестве токсическая зернистость нейтрофилов появляется при распаде опухолевой ткани под влиянием лучевой терапии. Другими словами, костный мозг готовит молодых «солдат» на пределе своих возможностей и отправляет их «в бой» раньше срока.

Рисунок с сайта bono-esse.ru

Лимфоциты

Лимфоциты являются вторыми по численности лейкоцитами крови и бывают разных подвидов.

Краткая классификация лимфоцитов

В отличие от нейтрофилов-«солдат», лимфоциты можно отнести к «офицерам». Лимфоциты «обучаются» дольше (в зависимости от выполняемых функций они образуются и размножаются в костном мозге, лимфоузлах, селезенке) и являются высокоспециализированными клетками (распознавание антигена, запуск и осуществление клеточного и гуморального иммунитета, регуляция образования и деятельности клеток иммунной системы). Лимфоциты способны выходить из крови в ткани, затем в лимфу и с ее током возвращаться обратно в кровь.

Для целей расшифровки общего анализа крови надо иметь представление о следующем:

30% всех лимфоцитов периферической крови — короткоживущие формы (4 суток). Это большинство B-лимфоцитов и Т-супрессоры.
70% лимфоцитов — длительно живущие (170 дней = почти 6 месяцев). Это остальные виды лимфоцитов.

Разумеется, при полном прекращении кроветворения сначала в крови падает уровень гранулоцитов, что становится заметным именно по количеству нейтрофилов, поскольку эозинофилов и базофилов в крови и в норме очень мало. Чуть позже начинает снижаться уровень эритроцитов (живут до 4 месяцев) и лимфоцитов (до 6 месяцев). По этой причине поражение костного мозга выявляется по тяжелым инфекционным осложнениям, которые очень трудно лечить.

Поскольку развитие нейтрофилов нарушается раньше остальных клеток (нейтропения — меньше 1.5 × 109/л), то в анализах крови чаще всего выявляется именно относительный лимфоцитоз (больше 37%), а не абсолютный лимфоцитоз (больше 3.0 × 109/л).

Причины повышенного уровня лимфоцитов (лимфоцитоза) — больше 3.0 × 109/л :

вирусные инфекции,
некоторые бактериальные инфекции (туберкулез, сифилис, коклюш, лептоспироз, бруцеллез, иерсиниоз),
аутоиммунные заболевания соединительной ткани (ревматизм, системная красная волчанка, ревматоидный артрит),
злокачественные опухоли,
побочное действие лекарств,
отравления,
некоторые другие причины.

Причины сниженного уровня лимфоцитов (лимфоцитопении) — меньше 1.2 × 109/л (по менее строгим нормам 1.0 × 109/л):

апластическая анемия,
ВИЧ-инфекция (первично поражает разновидность Т-лимфоцитов, называемую T-хелперами),
злокачественные опухоли в терминальной (последней) фазе,
некоторые формы туберкулеза,
острые инфекции,
острая лучевая болезнь,
хроническая почечная недостаточность (ХПН) в последней стадии,
избыток глюкокортикоидов.

Роль лимфоцитов в организме

Лимфоциты – это самая большая группа из всех разновидностей лейкоцитов. Они выполняют следующие функции:

выработка антител, которые борются с патогенными микроорганизмами и запоминают их генетический материал;
взаимодействие с патогенными микроорганизмами, их уничтожение различными методами (поглощение, выделение медиаторов);
регулировка других клеток организма.

Лимфоциты также делятся на разновидности. Каждая из них выполняет определенную функцию.

B-клетки – подтип, распознающий чужеродный белок, выделяющийся в ответ на его проникновение антитела. Они уничтожают патоген, запоминают его генетический материал, чтобы при следующем проникновении у человека не развилась острая реакция.
Т-клетки – направлены против чужеродного микроорганизма, делятся на несколько разновидностей. Киллеры уничтожают патоген. Хелперы вырабатывают антитела. Супрессоры снижает иммунную активность.
NK-клетки – распознают нарушения в собственных клетках организма. Способны уничтожать раковые, поврежденные, мутировавшие образования.

Элементы образуются в красном костном мозге. Они происходят из стволовых клеток. На каждом этапе дифференцировки их генетический материал перестраивается. Форменные элементы приобретают белковые молекулы, позволяющие им противостоять патогенным микроорганизмам, обезвреживать их.

В лабораторной диагностике определяется количество лимфоцитов. Если мануальный (ручной) подсчет лимфоцитов повышен, это означает, что в организме образовался инфекционный очаг. Сниженное число свидетельствуют о пониженной функции иммунной системы. Врач-лаборант оценивает параметры каждой клетки и внутреннюю структуру. Отклонение может свидетельствовать о продукции некачественных форменных элементов, развитии злокачественных процессов.

Методики подсчета количества лимфоцитов

Существуют ручные и полуавтоматические методики подсчета. К первому типу относятся:

использование камеры Горяева;
подсчет клеток под микроскопом;
подсчет в биоптате.

Узнай больше о методах подсчета лейкоцитов в крови и моче.

С помощью вышеперечисленных методик врач не только рассчитывает число лимфоцитов с помощью формулы, но и рассматривает их параметры. Оценивается внутреннее содержимое, наличие мембраны, размер каждой клетки.

Если использовать обычную кровь без добавления химических реактивов, лимфоциты виды не будут. Поэтому к биологической жидкости добавляют вещества, способствующие свечению или прокрашиванию клетки:

иммунофлюоресценция – идентификация всех поверхностных структур лимфоцитов с помощью определения различного свечения при добавлении флюоресцентной метки;
иммуноферментный метод – добавление пероксидазной метки, что вызывает цветную реакцию при соединении фермента и субстрата, клетки становятся видны в микроскопе.

Отрицательная сторона ручных методов – возможность ошибки врача лаборанта в подготовке, расчетах. Повышен риск неправильного пересчета. Использование полуавтоматических анализаторов полностью устраняет возможность такой ошибки. Аппарат самостоятельно пересчитывает выбранные форменные элементы, заносит число на бланк анализа.

Отрицательная сторона использования полуавтоматического анализатора – отсутствие дифференцировки клеток по внешним данным. Прибор не улавливает мутировавшие, поврежденные, злокачественные образования.

Подсчет лимфоцитов в камере Горяева

Для подсчета клеток с помощью камера Горяева устройство тщательно дезинфицируют. Применяют спиртовой раствор. Если приспособление готово к работе, на нем появляются радужные полосы.

Для анализа используют капиллярную или венозную кровь. Последний вариант намного точнее. В пробирку наливают кровь до метки 0,5. Добавляют уксусную кислоту 5% до отметки 11. Получившуюся жидкость перемешивают. Уксусная кислота способствует разрушению оболочек клетки. Под микроскопом учитываются только ядра. С помощью добавления химического вещества кровь разводится в 20 раз.

Далее методика исполняется в несколько этапов.

В пробирку с разведенной биологической жидкостью и опускается стеклянная палочка. Ее подносят к камере и заполняют пустоты.
Устройство должно постоять 10 минут, чтобы лимфоциты заполнили сетку камеры.
Микроскоп наводят на углубления в камере, высчитывают все лимфоциты в 100 больших квадратах сетки.
Полученное число подставляют в формулу для расчета. Она позволяет перевести количество клеток из разведения в мкл на 1л биологической жидкости.

Л=В×250×20×106/100

Л – число лимфоцитов в 1 л биологической жидкости;
В – число лимфоцитов в 100 квадратах;
250 – множитель для перевода объёма крови;
20 – разведение уксусной кислотой;
100 – количество квадратов, в которых рассчитывались форменные элементы;
106 – количество мкл в 1л.

Полученные данные заносятся в бланк исследования. С ним пациент отправляется к лечащему врачу. Только он сможет определить состояние здоровья пациента по результатам. Далее назначают дополнительные исследования или лечение.

Читайте о подсчете лейкоцитов в камере Горяева.

Формула подсчета лимфоцитов в крови

Для постановки диагноза необходимо знать нормальную лимфоцитарную формулу. Она зависит от возраста пациента.

Возраст пациента	Лимфоциты, %
Первые трое суток после рождения	18-28
От 3 суток до 2 недель	35-44
До шести месяцев	40-70
7 месяцев – 3 года	43-78
4-6 лет	34-63
7-9 лет	27-45
10-18 лет	25-43
Взрослые люди	23-43

Незначительное повышение или снижение показателя не говорит о появлении воспалительного процесса или заболевания. Анализ повторяют. О развитии болезни говорит повышение или снижение показателя на несколько и более единиц.

В зависимости от разновидности элементов формула представлена в процентном соотношении:

Т-клетки – 67-80%;
B клетки – 7-20%;
NK-клетки – 4-20%.

В отдельности каждая разновидность может колебаться в большую или меньшую сторону. Поэтому выделяют следующие виды нарушений:

относительное – когда 1 из категорий лимфоцитов повышена, а другая – понижена, но в сумме число клеток остается в пределах нормы;
абсолютное – изменение большого количества одного или нескольких звеньев лимфоцитов, что в сумме приводит к сильному изменению в верхнюю или нижнюю сторону.

Если абсолютный подсчет лимфоцитов высокий, это означает, что иммунная система усиленно борется с воспалительным, вирусным, инфекционным, злокачественным процессом.

Подсчет лимфоцитов под микроскопом

Для подсчета под микроскопом используют 2 разновидности анализа.

Камера Горяева. Клетки не фиксированы, непрокрашены. Используется только полученная биологическая жидкость. Счет ведется с помощью сетки, которая микроскопически находится в углублениях приспособления.
Мазок крови. Получают капиллярную кровь. Каплю наносят на предметное стекло, размазывают. Сверху наливают краску, которая фиксирует и прокрашивает клетки. С помощью методики можно пересчитать форменные элементы в любое время.

Микроскоп устанавливают сверху предметного стекла. Водят окуляр слева направо, вниз, справа налево до конца образца. Врач-лаборант не только пересчитывает все лимфоциты, но и рассматривает их структуру. Можно выявить изменения в размере, структуре, прокрашивании. Определяют мутировавшие клетки или атипичные, которые могут быть признаком ракового заболевания.

А если врач-лаборант использует метод Горяева, используют специальную формулу, которая переводит микролитры в литры крови. При пересчете клеток под микроскопом, врач записывает только число единиц, которые он обнаружил. В обоих методиках добавляют данные о появлении атипичности.

Подсчет лимфоцитов в биоптате

После получения биоптата возможен ручной подсчет лимфоцитов. Методика создания мазка зависит от размера полученного биоматериала:

нанесение образца непосредственно на стекло, если его мало;
изготовление мазка из осадка после центрифугирования, если биоматериала много;
изготовление мазка из осадка промывных вод (жидкость, стекающая с тканей после промывания дистиллированной водой) после центрифугирования;
отпечаток различных поверхностей ткани, если они находятся в твердом состоянии.

После нанесения небольшого количества образца на предметное стекло, его растягивают с помощью шпателя. Отпечатки не требуют растягивания. Полученный образец окрашивают с помощью специализированных красителей. Выжидают от 20 минут до нескольких часов, в зависимости от выбранной методики. За это время все лимфоциты приобретают синий и фиолетовый оттенок.

Микроскопная мазка осуществляется с помощью передвижения окуляра слева направо, вниз, справа налево до конца образца.

С помощью методики выявляется место локализации воспалительного процесса, в котором накапливаются иммунные клетки. Лаборант оценивает качество и количество клеток.

Подсчет лимфоцитов – методика, с помощью которой выявляют состояние иммунной системы и определяют воспалительный процесс. Возможно выявление полного числа клеток или дифференциальный подсчет лимфоцитов. Последняя разновидность позволяет выявить, какое из звеньев иммунной системы нарушено. Не рекомендуется самостоятельно приступать к лечению. Расшифровкой анализа занимается лечащий врач.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Полезное видео

Подсчет количества тромбоцитов в крови – подробно о методиках
Подсчет нейтрофилов – простой, но необходимый анализ
Детский общий анализ крови: разбираем “по полочкам”
Откуда лучше брать общий анализ крови – пальца или вены?

Источник