Эндометриоз и повышенные лимфоциты

Изучение субпопуляционного состава мононуклеарных клеток
периферической крови и перитонеальной жидкости при разных стадиях эндометриоза
(метод проточной цитофлуориметрии) выявило значительные изменения в составе лимфоцитов,
более выраженные в перитонеальной жидкости пациенток. Описанные нарушения в
иммунитете могут играть немаловажную роль в возникновении и развитии
заболевания.

Эндометриоз и илмфоциты

Субпопуляции лимфоцитов периферической крови и
перитонеальной жидкости у женщин с эндометриозом Д.В. Куявская, К.В. Григорян,
С.Ф. Торубаров, Г.Т. Сухих Научный центр акушерства, гинекологии и
перинатологии РАМН, Москва Проблемы репродукции, 2-1999, с.62-64 В начало…

Изучение субпопуляционного состава мононуклеарных клеток
периферической крови и перитонеальной жидкости при разных стадиях эндометриоза
(метод проточной цитофлуориметрии) выявило значительные изменения в составе лимфоцитов,
более выраженные в перитонеальной жидкости пациенток. Описанные нарушения в
иммунитете могут играть немаловажную роль в возникновении и развитии
заболевания.

Ключевые слова:

эндометриоз, лимфоциты, перитонеальная жидкость,
цитофлюориметрия.

Словарь сокращений

ФИТЦ — флуоресцеинизотиоцианат

ФЭ — фикоэритрин

ГКГС — главный комплекс гистосовместимости ЕК-клетки —
естественные киллерные клетки ТКР — рецептор Т-клеток Наружный генитальный
эндометриоз является важной проблемой современной гинекологии, так как,
несмотря на совершенствование в течение последнего десятилетия методов
диагностики и лечения, заболевание остается одной из самых частых патологий у
женщин репродуктивного возраста: заболевание поражает 15-20% женщин в возрасте
20-35 лет [4]. Вопрос об этиологии и патогенезе эндометриоза, несмотря на
большое число концепций, в которых делается попытка дать объяснение причинам и
механизмам данного заболевания, остается открытым. Результаты исследований
последних лет свидетельствуют о существенной роли в патогенезе эндометриоза
нарушений иммунного гомеостаза. У пациенток с эндометриозом выявляются
значительные изменения как на системном (увеличение содержания Т-,
ЕК-лимфоцитов в периферической крови), так и на локальном (возрастание
количества лимфоцитов, нарушение функциональной активности естественных
киллерных клеток (ЕК-клеток) в перитонеальной жидкости) уровнях [8, 14]. При
этом большинство авторов рассматривают смешанную группу больных эндометриозом,
куда входят пациентки со всеми стадиями заболевания. В настоящем исследовании
мы изучали содержание лимфоидных клеток и их фенотипы в периферической крови
(ПК) и перитонеальной жидкости (ПЖ) женщин с эндометриозом в зависимости от
степени распространенности заболевания.

Материал и методы

В настоящее исследование вошло 40 пациенток, проходивших
обследование и лечение в Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии
РАМН по поводу наружного генитального эндометриоза, и 17 соматически здоровых
женщин с нормальной репродуктивной функцией, поступивших в центр для проведения
хирургической стерилизации (группа контроля).

Пациентки с наружным генитальным эндометриозом были
разделены на две группы, сформированные на основе диагноза. В 1-ю группу вошли
женщины с I-II степенью распространенности эндометриоза (по классификации
Американского общества фертильности), во 2-ю группу — с III-IV степенью
распространенности. Материалом для
исследования служили клетки ПК и ПЖ пациенток с эндометриозом и женщин контрольной
группы. ПК получали из локтевой вены
обследуемых лиц в асептических условиях в пробирки, содержавшие 0,5 мл раствора
гепарина в среде 199 (25 ЕД гепарина на 1 мл крови). Выделение мононуклеарных
клеток (МНК) проводили центрифугированием на градиенте плотности фиколла
(Lymphocyte Separation Medium, Flow Laboratories, США, r=1,077 г/см2).

ПЖ собирали во время проведения оперативной лапароскопии
по поводу эндометриоза либо стерилизации по Zemm. ПЖ собирали из дугласова и
переднематочного пространства непосредственно после вхождения в полость малого
таза, до начала лапароскопических манипуляций для предотвращения попадания в ПЖ
крови. Геморрагические образцы перитонеальной жидкости не исследовали. ПЖ
собирали в стерильные гепаринизированные пробирки (Falcon, США) при комнатной
температуре и максимально быстро доставляли в лабораторию [15]. Мононуклеарные
клетки (МНК) ПЖ выделяли аналогично выделению МНК крови. Выделенные МНК ПК и ПЖ окрашивали для
последующего анализа на проточном цитофлуориметре, используя моноклональные
антитела:

Anti-Leu-4
(CD3), Anti-Leu-3a (CD4), Anti-Leu-2a (CD8), Anti-Leu-11b (CD16), Anti-Leu-12
(CD19), Anti-TCRgd (, США).
Для контроля неспецифического связывания моноклональных антител
использовали соответствующие контроли изотипов иммуноглобулинов (, США),
меченные ФИТЦ и ФЭ.

Фенотипирование лимфоцитов ПК и клеток ПЖ проводили на
проточном цитофлюориметре (Bio-Rad, Италия). Из каждой пробы анализировали 5000
жизнеспособных клеток, дискриминируемых по интенсивности свечения пропидиума
йодида.

Cтатистическая обработка экспериментальных данных
проводилась с помощью компьютерной программы , достоверность межгрупповых
различий определялась по t-критерию Стьюдента. Данные представлены в виде
среднего ошибка среднего (М m).

Результаты

В ПК женщин с III-IV степенью эндометриоза обнаружено
достоверное снижение общего количества Т-лимфоцитов, а также выраженное
повышение процентного содержания В- и ЕК-клеток (р<0,01). По этим
показателям были зафиксированы также межгрупповые различия. Изменения в клеточном звене иммунитета у женщин
с малыми формами эндометриоза выражались в снижении содержания клеток CD8+
фенотипа и увеличении относительного количества -Т-клеток (табл. 1).

Таблица 1. Относительное содержание (в % ) основных
клеточных популяций в ПК женщин с эндометриозом разной степени и контрольной
группы (M m)

Кластер дифференцировки (CD)Контрольная группа
(n=17)Больные эндометриозом I-II степени (n=20)III-IV степени (n=20)

CD364,2 1,5962,0 1,456,8 2,2a

CD438,7 1,337,5 1,734,9 1,8

CD825,6 1,320,7 1,7a24,5 2,0

CD4/CD81,6 0,12,1 0,2a1,7 0,2 -Т-клетки4,1 0,957,2
0,73b6,7 1,6 CD197,2 0,86,8 1,010,5 0,8bc CD1616,5 1,418,7 1,325,7 1,5bc
Примечание. Здесь и в табл. 2: a — статистически значимые различия по
t-критерию Стьюдента в сравнении с соответствующим контролем: p<0,05; b —
p<0,01; c — статистически значимые различия между группами эндометриоза,
p<0,05.

Известно, что величина <индекса иммунорегуляции>
(CD4/CD8) является важным показателем гармоничной функции иммунной системы. Как
следует из представленных данных, у больных эндометриозом I-II стадии
отмечается тенденция к увеличению этого показателя, по-видимому, за счет
снижения содержания клеток CD8+. При
сравнении содержания лимфоцитов в ПЖ пациенток с эндометриозом и здоровых женщин
не выявлено различий в относительном количестве В-клеток (CD19+) и
ЕК-лимфоцитов (CD16+), тогда как во 2-й группе в Т-клеточном звене было
обнаружено значительное увеличение как общего количества Т-лимфоцитов,
оцениваемого по содержанию клеток CD3+, так и повышение содержания клеток
регуляторных субпопуляций — хелперов/индукторов (CD4+) и
супрессоров/цитотоксических (CD8+) (табл. 2). Данные различия оказались
статистически достоверными при сравнении с результатами анализа не только в
контроле, но и в 1-й группе. В 1-й группе исследования не отмечено изменения
содержания Т-лимфоцитов, за исключением клеток, экспрессирующих -Т-клетки.

Таблица 2. Относительное содержание (в %) основных
клеточных популяций в ПЖ женщин с эндометриозом разной степени и контрольной
группы Кластер дифференцировки (CD)Контрольная группа (n=17)Больные
эндометриозом I-II степени (n=20)III-IV степени (n=20)

CD349,5
4,158,3 2,267,4 3,6b

CD421,8
1,922,1 1,629,1 2,1aс

CD832,6
1,731,1 2,139,8 3,1aс

CD4/CD80,7 0,061,1 0,20,9 0,12

-Т-клетки7,1 1,217,3 3,4aс10,6 2,1

CD191,2 0,40,9 0,42,2 0,3

CD168,3 2,218,1 8,98,2 2,1

Обсуждение результатов

Исследованию популяций лимфоцитов ПК при эндометриозе
было посвящено много работ, так как известно, что патологические изменения в
органах и тканях, содержащих большое количество иммунокомпетентных клеток,
могут вызывать значительные изменения в клеточном составе ПК [17], и путем
оценки субпопуляционного состава лимфоцитов ПК можно получить информацию о
состоянии иммунной системы в целом. При
фенотипировании лимфоцитов ПК пациенток с разной степенью эндометриоза выявлены
следующие нарушения иммунитета в группах: при малых формах содержание
супрессорно-цитотоксической субпопуляции Т-клеток (CD8+) изменялось в сторону
снижения, вследствие чего имеет место увеличение иммунорегуляторного индекса
CD4/CD8, кроме того, отмечалось увеличение процента -Т-клеток. При III-IV
степени эндометриоза были обнаружены другие изменения — повышение содержания
В-клеток и ЕК-лимфоцитов. Увеличение содержания ЕК-клеток, ответственных за
уничтожение попавших в перитонеальную полость путем ретроградного заброса
менструальной крови [9], может быть немаловажным фактором при данном
заболевании. Учитывая, что при эндометриозе, с одной стороны, происходит
увеличение содержания ЕК-клеток, а, с другой — снижение ЕК-активности [10, 14],
можно предположить функциональный дефект этого звена иммунитета. Уменьшение относительного количества клеток
фенотипа CD3+, зафиксированное в группе женщин с III-IV степенью эндометриоза,
по-видимому, происходит вследствие снижения содержания обеих (CD4+ и CD8+)
иммунорегуляторных субпопуляций, поэтому иммунорегуляторный индекс не
изменялся. Таким образом, результаты фенотипирования лимфоцитов ПК подтвердили
ранее выявленные нарушения клеточного звена иммунитета у больных эндометриозом [2,
5, 15], которые различны по проявлениям у женщин с разной степенью
заболевания. Как и предполагалось,
значительно более выраженные изменения в функционировании иммунной системы
обнаруживаются на уровне локальном, в непосредственной близости от имплантатов
— в ПЖ. Последняя, представляющая
микроокружение очагов эндометриоза, содержит как множество растворимых
факторов, влияющих на процесс имплантации и роста эндометриоидных эктопий, так
и большое количество клеточных элементов, эти факторы продуцирующих [10,
13]. Существует много работ, указывающих
на нарушения в клеточном иммунитете при эндометриозе.

Нами показано, что В-клетки представлены в ПЖ как больных
эндометриозом, так и здоровых женщин в очень незначительном (1-2%) количестве.
Выявленные изменения иммунитета на локальном уровне касались в основном
Т-клеточного звена и проявились увеличением общего количества Т-лимфоцитов,
содержания клеток хелперной субпопуляции (CD4+) и относительного содержания
-Т-лимфоцитов. Иммунорегуляторный индекс
также возрастал. Эти результаты подтверждают наличие воспалительного процесса в
перитонеальной полости [3, 7]. Увеличение при эндометриозе содержания
Т-лимфоцитов, в активированном состоянии вырабатывающих спектр цитокинов и
факторов роста, в свою очередь способных усиливать рост эндометриоидных клеток
in vitro [11], предполагает нарушения в регуляции иммунного ответа. В последние
годы выявлены многочисленные биохимические различия эндометриоидной ткани с
эутопическим эндометрием, вследствие чего эктопический эндометрий может быть
процессирован антиген-презентирующими клетками и представлен Т-лимфоцитам [16].
<Антигенность> собственного эндометрия, имплантировавшегося в
перитонеальной полости и вызвавшего заболевание, подтверждает также увеличение
содержания на начальных этапах заболевания -Т-лимфоцитов, клеток, которые, как
известно, независимы от главного комплекса гистосовместимости (ГКГС) и способны
быстро распознавать антиген и реагировать на него [12]. В то же время
повышенное количество -Т-лимфоцитов определяется у больныхаутоиммунными
заболеваниями, например, с синдромом Сьогрена [6], что также косвенно
подтверждает возможность аутоиммунных нарушений, которые описывают многие
исследователи, у больных эндометриозом. По-видимому, вслед за активацией
иммунных процессов на начальных стадиях заболевания на более поздних
воспалительный процесс, развивающийся в ответ на присутствие эндометриоидной
ткани в перитонеальной полости и из-за невозможности удаления очагов
эндометриоза, прогрессирует, в результате чего возникают инфильтрация, фиброз и
инкапсуляция очагов эндометриоза [1]. Это подтверждается результатами нашего
исследования, в ходе которого были выявлены изменения в Т-клеточном звене
иммунитета при III-IV степени эндометриоза.

Все вышеуказанные нарушения в иммунной системе,
по-видимому, являются важным звеном в патогенезе эндометриоза. Понимание
иммунных процессов, происходящих при эндометриозе как на локальном, так и на
системном уровнях, несомненно, позволит найти новые методы диагностики и
лечения этого заболевания.

Литература

1. Баскаков В.П.
Клиника и лечение эндометриоза. Л Медицина 1990;

240.

2. Старцева Н.В.
Клинико-иммунологические аспекты генитального эндометриоза. Акуш и гинек 1980; 3: 23.

3. Badaway S., Cuenca V., Freliech H.
Endometrial antibodies in serum and peritoneal fluid of infertile patients with
and without endometriosis. Fertil Steril 1990; 53: 930-932.

4. Barbieri R.L. Etiology and epidemiology of
endometriosis. Amer J Obstet Gynecol 1990; 162: 2: 565-567.

5. Dmowski W.P. Immunological aspects of
endometriosis. Int J Gynaecol Obstet 1995; 50: Suppl 1: 3-10.

6. Gerli R., Agea E., Muscat C. et al. Functional
characterization of bearing the gamma-delta T-cell receptor in patients with
primary Sjogren’s syndrome. Clin Exp Rheumatol 1993; 11(3): 326.

7. Halme J., Becker S., Haskill S. Altered
maturation and function of peritoneal macrophages: possible role in
pathogenesis of endometriosis. Am J Reprod Immunol 1987; 156: 783- 788.

8. Haney A., Muscat J., Weinberg J. Peritoneal
fluid cell populations in infertility patients. Fertil Steril 1981; 35:

696-699.

9. Hill J.A., Heidi M.P., Schiff I., Anderson
D.J. Characterization of leucocyte subpopulations in the peritoneal fluid of
women with endometriosis. Fertil Steril 1988; 50(2): 216-223.

10. Ho H.-H., Chao K.-H., Chen H.-F. et al. Peritoneal
natural killer cytotoxicity and CD25+CD3+ lymphocyte subpopulation are
decreased in women with stage III-IV endometriosis. Hum Reprod 1995;

10: 10:
2671-2675.

11. Hornung D., Ryan I.P., Chao V.A. et al. Immunolocalization
and regulation of the chemokine RANTES in human endometrial end endometriosis
tissues and cells. J Clin Endocrinol Metab 1997;

82(5):
1621-1628.

12. Kaufmann S.H. gd and other inconventional T
lymphocytes: What do they see and what do they do? Proc Nat Acad Sci USA 1996;
93:

2272-2279.

13. Kubicka U., Olszewski W.L., Tarnowski W.,
Bielecki K., Ziolkowska A., Wierbicki Z. Normal Human Immune Peritoneal Cells:

Subpopulations
and Functional Characteristics. Scand J Imminol 1996;

44:
157-163.

14. Oosterlynk D.J., Meuleman C. et al. The
natural killer activity of peritoneal fluid lymphocytes is decreased in women
with endometriosis. Fertil Steril 1992; 58: 2: 290.

15. Oosterlynk D.J., Meuleman C., Lacquet F.A.
Flow Cytometry analysis of lymphocyte subpopulation in peritoneal fluid of
women with endometriosis. Am J Reprod Immunol 1994; 31(1): 25-31.

16. Ota H., Igarashi S. Expression of major
histocompatibility complex class II antigen in endometriotic tissue in patients
with endometriosis and adenomiosis. Fertil Steril 1993; 60(5): 834-838.

17. Westermann J., Pabst R. Lymphocyte subsets in
the peripheral blood: diagnostic window on the lymphoid system? Immunology
Today 1990; 11: 11: 406-409.

Copyright © 2000-2005, РОО «Мир Науки и Культуры». ISSN
1684-9876