Иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цитометрии

Одним из методов клинической диагностики является исследование крови способом иммунофенотипирования лимфоцитов. В его основе реакция между антителами и антигенами, которая используется для определения типов клеток крови, взятых из образцов биологического материала – крови, лимфатических узлов или костного мозга.

Анализ проводится с использованием специальных маркеров или меток, которые присоединяются к антигенам клеток. С помощью лабораторного оборудования отслеживают маркеры, производят подсчет клеток крови. Знание количества каждой из них позволяет квалифицировать опухолевые заболевания, подтвердить диагноз пациенту с определением конкретного его типа, например: достоверно установить вид лимфомы, лейкоза. Такая точная диагностика позволяет сделать выбор наиболее эффективной схемы лечения.

Метод исследования, условия, необходимые для проведения

Иммунофенотипирование – это исследование лимфоцитов, которое помогает увидеть клетки крови, распознать их принадлежность к определенному виду. Исследование проводят с использованием современного диагностического оборудования – цитофлюориметров или особых микроскопов, способных опознавать люминесцирующие составляющие, которые помогают различать разновидности люминесцирующих кровяных телец, вести точный их подсчет в каждой пробе. Оборудование позволяет опознать каждую из меток. Маркирование клеток это добавление в пробу антикоагулянта (реагент К2ЭДТА).

Забор образца для анализа производится из вены в области локтевого сустава. Для точного результата пациент должен соблюсти условия – проба берется натощак в утреннее время. В некоторых случаях допускается легкий прием пищи за 4 часа до процедуры, пациенту можно выпить небольшое количество обычной воды. Занятия спортом накануне диагностики или прием алкоголя запрещен, нарушение запрета приводит к искаженным результатам анализа. Повышенная психоэмоциональная нагрузка недопустима.

Для взятия крови специалист использует вакуумную пробирку. Ее применение позволяет достичь точного результата исследования, снизить болевые ощущения, точно произвести соотношение биологического материала и реагента.

После того, как образец поместили в пробирку, лаборант перемещает взятую пробу с антикоагулянтом, для этого требуется 10 раз медленно перевернуть емкость.

Для хранения и транспортировки материала для анализа требуется соблюдение условий: температурного режима при хранении образца от 18 до 23°С, сохранения положения пробирки вертикально. Срок ожидания результатов не превышает 24 часов от взятия пробы. Время проведения исследования 4 часа.

Количественный состав каких клеток отражает результат анализа?

В ходе проведения исследования специалисты клинической лаборатории отслеживают показатели в периферической крови пациента, возможные поражения. На бланк анализа заносят показатели:

1. Абсолютное количество лимфоцитов, имеющих здоровое округлое ядро без патологий.
2. Содержание Т-клеточных лимфоцитов – ядро этого вида кровяных телец образуется и созревает в тимусе или вилочковой железе. Обеспечивает иммунную реакцию организма в определенных условиях, осуществляет контроль над гуморальным ответом организма работой В-лимфоцитов, которые образовывают антитела. Обозначают ядро Т-клеточного лимфоцита как CD3+.
3. Количественное значение Т-хеплеров (ядро обозначается CD3+CD4+) – разновидности Т-лимфоцитов, оптимальное количество которых в крови способствуют усилению иммунного ответа организма на поражение чужеродным антигеном, их 2 типа. Т-клеточный хелпер первого типа является «защитником» от опухолевых новообразований, вирусных агентов, участвует в защитных воспалительных реакциях. Второй Т-клеточный тип обеспечивает взаимосвязь с гуморальным иммунитетом, участвует в выработке иммуноглобулина Е – веществе, воздействующим на агрессивные аллергены внешней среды, смягчает поражение ими.
4. Количество Т-цитотоксических лимфоцитов, ядро которых принято обозначать как CD3+CD8+. Такие лимфоциты распознают поражение клеток собственного организма и проводят их лизис или растворение. Таким способом организм борется с опухолевыми тканями, с поражением бактериями, которые паразитируют на клеточном уровне. Ядро Т-цитотоксического лимфоцита важный компонент иммунитета, направленного на уничтожение вирусов.
5. В-лимфоциты, обозначаемые символами СD19+, вырабатывают активные вещества (антитела), действие которых направлено на поддержание гуморального иммунитета.
6. Количество ЕК-клеток, их ядро обозначается как CD3-CD16+CD56+. Их называют естественными, или натуральными, киллерами. Такое название определяет их неиммунная цитологическая активность, которая направлена на клетки-мишени, имеющие неопластические изменения.
7. Т-ЕК (ЕКТ) клетки, ядро которых имеет естественную киллерную активность, защищают от поражения клеток, имеющих качества и признаки Т-лимфоцитов.
8. Иммунорегуляторный индекс, который показывает соотношение Т-хелперов и Т-цитотоксических клеток в крови, обозначается в анализе в виде соотношения CD3+CD4+/CD3+CD8+.

Когда назначают исследование?

Фенотипирование видов лимфоцитов назначают для диагностики ряда заболеваний. Иммунологи назначают исследование, если имеются основания заподозрить одни из них или при наличии «ярких» признаков других. Например: расшифровка количества лимфоцитов с определенным фенотипом понадобится при:

• инфекционных заболеваниях, поражении хронического характера или если болезнь имеет затяжной характер,
• аллергических реакциях организма,
• проявлении устойчивых признаков и симптомов, указывающих на иммунодефицит врожденного или приобретенного свойства,
• подозрении на опухолевые образования доброкачественной или злокачественной природы,
• заболеваниях аутоиммунного типа, спровоцированных расстройством защитной системы, поражением собственного организма,

Диагностика периферической крови требуется в других случаях. Ее назначат перед серьезным оперативным вмешательством, которое требуется больному в плановом порядке. При иммунофенотипировании врач узнает все процессы иммунного характера, происходящие у конкретного больного, что позволяет скорректировать защитные процессы, избежать клеточного поражения, и нормализовать их работу. Большое значение для врача имеют показатели различных видов кровяных телец, Т-клеточный состав крови в послеоперационный период, особенно в случаях с развитием патологических процессов.

Метод применяют и для оценки состояния человека, которому требуется трансплантация органов или проведена операция – анализ на иммунофенотипирование проведут на подготовительном этапе и во время послеоперационного восстановления, чтобы предупредить поражение и отторжение органа. Направление на анализ получают пациенты, лимфоциты которых могут изменить качественный и количественный состав из-за лечения заболеваний медикаментами определенных групп – иммуномодуляторами, иммунодепрессантами или цитостатиками.

Нормы и референсные значения содержания в крови частиц определенного вида зависят от возраста пациента. Врачи для оценки показателей используют специальные таблицы, в которых указаны оптимальные значения, пределы отклонений.

Какие проблемы отражают повышенные и пониженные Т-клеточные лимфоциты

Результат анализа покажет отклонение от нормы по количеству Т-клеточных лимфоцитов. Повышение их количества свидетельствует об иммунном воспалении, поражении или гиперактивности защитных процессов пациента. Такое превышение нормы вызывают заболевания – лимфолейкоз (острая и хроническая стадии), ряд вирусных и бактериальных инфекций в начале развития болезни. Увеличение Т-лимфоцитов возможно при изменении характера заболевания, переход его в хроническую форму.

Если у обследуемого абсолютное число Т-клеточных лимфоцитов снижено, говорят о развитии иммунологического паралича. Он сопровождает воспалительный процессы, может указывать на развитие злокачественных опухолевых новообразований. Такой показатель выявляется, если больная сердечная мышца – миокард, при некоторых сложных травмах, его снижение вызывает курение.

Колебание числа В-лимфоцитов

Увеличение числа В-лимфоцитов сигнализирует о поражении организма воспалительным процессом, развивающимся в острой или хронической стадии. Его природа аллергического, аутоиммунного или инфекционного характера. Эти лимфоциты увеличиваются из-за В-лимфолейкоза, бронхиальной астмы, муковисцидоза, больной печени и при хронических патологиях. Увеличенные показатели по В-лимфоцитам в анализе отражают восстановление после инфекций, перенесенных в острой и тяжелой форме.

Если число В-лимфоцитов не соответствует нижним пределам нормы, при проведении дополнительной диагностики врач подтвердит пациенту развитие опухолевых новообразований, острые вирусные инфекции или инфекции бактериального типа, развитие очагов воспаления в организме больного.

Отклонения показателей естественных киллеров

Повышенному уровню естественных киллеров способствуют патологические процессы, связанные с:

• запуском онкологических процессов,
• тяжелым течением воспалительного процесса, воспалительные заболевания в хронической стадии,
• с избыточной выработкой антигенов, борющихся с бактериальным или вирусным процессом.

Содержание в клетках крови естественных киллеров может быть снижено из-за повышения уровня в крови Т-лимфоцитов и связано с процессами, вызывающими такое повышение.

Показатели Т-цитотоксических лимфоцитов

Если значение показателя CD8+ в превышающих норму цифрах, закономерно заподозрить опухолевое заболевание, вирусный процесс в активной стадии (при развитии вирусной, грибковой или внутриклеточной инфекции, заболеваний подобного типа).

Сниженные значения Т-цитотоксических лимфоцитов в результатах анализа предупреждают о процессах, развивающихся на фоне аутоиммунных болезней. Такой процесс подтверждает атаку аллергенов, развитие аллергии на момент обследования.

Какие процессы определяются по уровню Т-хелперов

Повышение содержание Т-хеплеров свидетельствует об остром воспалительном процессе в активной стадии. Иммунное воспаление отражает увеличение Т-хеплеров первого типа, рост показателя по второму типу определяет наличие воспалительного процесса аллергической природы. Обострение аутоиммунной патологии определяется, если Т-хеплеры обоих типов увеличены.

Снижение Т-хелперов происходит из-за состояния иммунологического паралича, выявляет иммунодефицит вторичного типа у больного.

Отклонения значений по уровню Т-ЕК клеток

Количество Т-ЕК клеток повышается, увеличиваясь по отношению к референсным значениям их содержания в крови по причине:

• наличия хронических воспалительных процессов с длительным периодом воздействия на иммунную систему,
• воспалительных процессов, сопровождаемых тяжелым протеканием, осложнениями при лечении,
• сохранение инфекции в активном состоянии в клетках организма на протяжении значительного периода времени.

Сниженные лимфоциты такого вида не отображают значимые процессы, не являются важными для диагностики.

Использование метода иммунофенотипирования лимфоцитов позволяет проводить диагностику патологий, заподозрить развитие опасных, опухолевых болезней. Метод является безопасным для обследуемого, не требует значительных финансовых затрат.

Загрузка…