Что такое смешанная культура лимфоцитов

СКЛ – смешанная культура лимфоцитов
MLC – mixed lymphocyte culture

Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.

Лимфоцит — центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.

Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина — “кирпичика” ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что “в бой” вступают клетки всех участников смешанной культуры.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.

Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.

Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.

Дело в том, что сохранение беременности — активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.

СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции.

Поэтому при обнаружении “плохой” конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.

Вопрос:
Подскажите, пожалуйста, можно ли сдать кровь на СКЛ после (через 4-5 дней) прохождения пациенткой курса внутривенного вливания иммуноглобулинов (для супрессии ВПГ-2; 3 капельницы по 25 мл через день)? Не повлияют ли иммуноглобулины на достоверность анализа СКЛ?

Отвечает Кухорева Татьяна Александровна
акушерско-гинекологическая клиника “Центр иммунологии и репродукции”:
Проведение курса терапии иммуноглобулинами может повлиять на результаты СКЛ. Поскольку иммуноглобулин воздействует на активность лимфоцитов, а в реакции СКЛ исследуется именно эта активность (в спонтанном состоянии, после смешивания с культурой лимфоцитов мужа, пула донорских клеток).
Желательно проводить исследование до использования иммуноглобулина либо через несколько недель (4-5) после терапии.
На результаты теста также могут влиять простудные заболевания, проведений вакцинаций, менструация.

Вопрос:
По результатам анализа интенсивность ответа в СКЛ снижена. В программе ЭКО на 14 ДПП ХГЧ был 11. Что делать?

Отвечает Айрапетов Давид Юрьевич
акушерско-гинекологическая клиника “Центр иммунологии и репродукции”:
Дело в том, что ребенок является наполовину чужеродным для организма матери. Эта является нормальным физиологическим явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Должны формироваться иммунные специальные защитные белки, которые оберегают плодное яйцо. Несовместимость супругов по HLA-антигенам и отличие зародыша от материнского организма является важным моментом, необходимым для сохранения и вынашивания беременности. Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к похожести зародыша на организм матери, что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются. Беременность воспринимается, как чужеродные клетки. В таком случае происходит самопроизвольное прерывание беременности. Для диагностики таких факторов невынашивания беременности проводится обследование на HLA-гены II класса (HLA-DRB1, DQA1 и DQB1-типирование), а также смешанная культура лимфоцитов. Слабое различие лимфоцитов супругов в СКЛ (смешанная культура лимфоцитов) и совпадение по HLA является показанием для проведения лимфоцитотерапии. Все это делается для того, чтобы повысить эффективность узнавания антигенов мужа в процессе формирования плаценты, что позволяет вовремя запустить механизмы сохранения беременности.

https://www.cironline.ru/articles/genetics/57/
__________________
*****************************

Серия сообщений “важное для Экошки”:
Часть 1 – Дневник Gordeya
Часть 2 – 10 принципов
…
Часть 10 – табличка по которой можно заценить свои шансы на имплантацию
Часть 11 – Невынашивание, с чем может быть связанно
Часть 12 – СКЛ – смешанная культура лимфоцитов
Часть 13 – ******
Часть 14 – <strong>Молитвы, в помощь семейным парам не имеющих детишек</strong><br /><br />
…
Часть 41 – Загадки анестезии
Часть 42 – Уникальные съемки…
Часть 43 – Blue Daisy Baby Photography

Серия сообщений ” Статьи”:
Часть 1 – Единственное животное,задающее вопросы
Часть 2 – Бездетность:наказание или промысел?
…
Часть 8 – табличка по которой можно заценить свои шансы на имплантацию
Часть 9 – Невынашивание, с чем может быть связанно
Часть 10 – СКЛ – смешанная культура лимфоцитов
Часть 11 – Что делать, чтобы все изменить
Часть 12 – Хронический эндометрит: от совершенствования диагностического подхода к оптимизации лечения
…
Часть 46 – Профессия -Сурогатная мать
Часть 47 – Загадки анестезии
Часть 48 – Имя.

Вторая часть эфира 2 июля.
HLA-гены и иммунология репродукции.   Кожный лоскут.   Иммунизация лимфоцитами (ЛИТ).  СКЛ – смешанная культура лимфоцитов.  Иммунологический фактор при невынашивании беременности.

Начало: Зачем нужны мужчины? Роль полового размножения. Теория Красной королевы. Введение в иммунологию репродукции.

HLA-гены и иммунология репродукции
Так какая же система самая разнообразная внутри организма и что обеспечивает защиту от инфекций? Это система генов иммунитета – HLA-гены. Все эти гены располагаются на 6-й хромосоме и определяют индивидуальность иммунного ответа, чувствительность к тем или иным стимулам.
Вот здесь как раз речь заходит об иммунологии репродукции, о том, чем занимается наш Центр. Если смотреть наш сайт, то можно увидеть, что существует так называемый аллоиммунный фактор бесплодия и невынашивания беременности. Он связан с антигеном тканевой совместимости, с похожестью или непохожестью по антигенам тканевой совместимости. Риски в репро-дуктивном процессе профессора-имунолога Валентина Ивановича Гавалло, который является родоначальником иммунологии репродукции в нашей стране.
Иммунология репродукции не сразу развивалась, как отдельное направление. Иммунологов всегда интересовало множество других вещей, а иммунология репродукции была интересна в последнюю очередь. Но всё же, в процессе развития в этой области медицины, иммунология репродукции сформировалась в отдельное направление. В какой-то момент было найдено, что есть определённые вещества, которые назвали антигенами тканевой совместимости или главным комплексом гистосовместимости, или системой антиген-лейкоцитов человека. Если эти компоненты совпадают у людей, то можно пересаживать органы и они будут приживаться в новом теле.

Кожный лоскут
Оказывается, что если во время беременности идёт непохожесть между плодом и матерью по антигенам тканевой совместимости, то в организме матери возникает ответ на эти антигены. Тогда в крови матери (и вообще, в крови рожавших женщин) можно обнаружить огромное количество антител против антигенов тканевой совместимости, которые плод наследовал от отца. И находясь внутриутробно, плод вызывал на себя иммунный ответ организма матери.
Исследователями было высказано предположение, что действие этих антител на плод очень вредно, так как в некоторых случаях они повреждали и убивали его. Такие случаи называют «привычное невынашивание беременности».
Для лечения этих случаев и сопутствующих осложнений нашли такой способ: у мужа брали лоскут кожи и подсаживали женщине, чтобы этот лоскут был иммуносорбентом вредных антител, образовавшихся во время предыдущих беременностей. Тогда у плода появлялась возможность спокойно развиваться. Такое лечение невынашивания беременности начали проводить в Америке, в Чехословакии, и далее, в Европе, и оно действительно работало.
В какой-то момент и в России, в Москве решили заниматься таким лечением. В Институте акушерства и гинекологии была создана лаборатория клинической иммунологии, заведующей которой стала Лидия Сергеевна Волкова. Она обратилась с предложением сотрудничества к молодому тогда ещё Валентину Ивановичу Говалло, который простажировался в Чехословакии у Гашека, известного иммунолога-трансплантолога; и посетил лабораторию Дассе в Париже. Гавалло начал разработку систем тканевого типирования ещё в Институте травматологии и ортопедии, и проводил эксперименты по пересадке кожных лоскутов на мышах.
Одной из первых пациенток стала женщина, у которой ранее было 15 выкидышей. Сама беременность наступала у неё легко, но потом она не могла её выносить. И было проведено ей вышеописанное лечение с подсадкой кожного лоскута мужа, которое тоже прошло успешно. А после этой беременности у пациентки были ещё две последующие удачные беременности. И в то время данный случай просто потряс врачей, проводивших это лечение. С тех пор эта методика начала широко применяться в России и в сопредельных государствах.

Иммунизация лимфоцитами
А иммунология репродукции продолжала развиваться. Скоро поняли, что упомянутые кожные лоскуты – не сорбенты, а иммуностимуляторы, вызывающие на себя реакцию отторжения. А эта методика – как раз та самая иммунизация, в процессе которой формируются антитела. И эти антитела – не повреждающего, а защитного характера. Они помогают вовремя распознать беременность внутри полости матки и включить на эту беременность адекватную реакцию, направленную на сохранение и выживание плода. Далее последовало совершенствование этой методики. Где-то на рубеже 70-80-х годов В.И.Говалло на одной конференции в Новосибирске задался вопросом о необходимости пересадки кожного лоскута. Гораздо проще, говорил он, взять из крови мужа лимфоциты (клетки, имеющие на себе высокую концентрацию антигенов тканевой совместимости второго класса) и просто ввести их женщине. И дальнейший результат будет таким же. После конференции с ним связалась профессор Сидельникова, заведующая отделением невынашивания беременности, и предложила начать проводить процедуры иммунизации пациенток предложенным им способом.
И они стали проводить такие процедуры, а их пациентки стали успешно вынашивать беременность. А затем случилось так, что Валентин Иванович поссорился с профессором Сидельниковой, они стали работать отдельно и возникли два способа лимфоцитоиммунизации.
В Центре акушерства и гинекологии процедуру проводили, вводя препарат многократно в небольших количествах.
А по методу Говалло лимфовзвесь вводилась однократно в количестве 200-250 миллионов клеток, и наш Центр выбрал этот метод, хотя оба способа хорошо работают.

СКЛ – смешанная культура лимфоцитов
Валентин Иванович был основным нашим консультантом при создании и открытии клиники, помогал запустить свою методику у нас. Сейчас мы типируем пациентов на гены тканевой совместимости второго класса. При обнаружении такой похожести – делаем иммунизацию лимфоцитами мужа, только мы добавили сюда ещё и смешанную культуру лимфоцитов (СКЛ).
Объясню, почему. Когда ещё я работал на кафедре и учился в аспирантуре, где-то в конце 80-х годов, нашей клинической базой был 7-й роддом, самый близкий к Кремлю, на Воздвиженке. После занятий я шёл в библиотеку имени Ленина и просматривал все новинки в публикациях из разных стран мира.
Одной из них было интересное многотомное «Руководство по акушерству и гинекологии» из Германии, где невынашиванию беременности был посвящен отдельный том. И в этом томе была целая глава по иммунологии невынашивания беременности, где предлагалось использовать смешанные культуры лимфоцитов для выявления пар, которым действительно нужна иммунизация, и отсекать тех, кому не нужна эта процедура. Таким образом я знал про эту дополнительную методику и стал использовать в наших клиниках, хотя многие не применяют её из-за некоторой сложности. У нас в Центре это отдельная программа по аллоиммунному бесплодию.

Иммунологический фактор при невынашивании беременности: роль совпадений по HLA
Но замечу, что не стоит гипертрофировать проблему иммунологического фактора при невынашивании беременности. Да, он значим, но не является единственной проблемой невынашивания.
Здесь немного вернемся опять к истокам генетики. В какой-то момент развития теорий о половом размножении возникла эта идея про совместимость по тканевым антигенам. Потому что половое размножение даёт разнообразие прежде всего по антигенам тканевой совместимости, по антигенам белков иммунной системы. И тогда решили найти такую популяцию, где приветствуется многодетность, где не используют контрацепцию, и где ведут здоровый образ жизни. Чтобы легче было выявить факторы, влияющие на наступление и течение беременности. И нашли подходящую популяцию в виде христианской общины хаттеритов (Гуттерово братство).
В такой популяции имеется полная похожесть супругов по антигенам тканевой совместимости второго класса. И среди их супружеских пар было выявлено, что там увеличен период между началом половой жизни и рождением первого ребёнка; увеличено количество случаев невынашивания беременности; и увеличены интервалы между рождением детей. При этом нет случаев бесплодия. И почти во всех таких супружеских парах более 10-ти детей.
Из этого исследования можно сделать вывод, что всё-таки влияние фактора тканевой совместимости ограничено. Поэтому, когда у нас есть пара с похожестью генов тканевой совместимости (а таких пар всего примерно 15%) в сочетании с невынашиванием беременности, нужно проводить более углубленные обследования по всем направлениям, касающимся невынашивания беременности. Тогда точно может быть выявлена необходимость проведения процедуры лимфоцитоиммунизации.

Продолжение: Внутригеномный конфликт